1.2實驗方法

1.2.1 PPP的純化

參考文獻的方法純化PPP。將噴霧幹燥的PPP粉末溶解在超純水中配製成10.0%（w/v）的蛋白溶液，在4℃條件下10000 r/min離心15 min以除去不溶性雜質，用透析袋（截留分子量為7 kDa）對上清液進行透析。最後將透析液冷凍幹燥即獲得PPP，密封後置於4℃保存備用。

1.2.2不同pH下PPP-NP的製備

取1.2.1製備獲得的PPP配製1%（w/v）的PPP溶液，室溫300 r/min攪拌2 h，冰箱中靜置過夜，充分水合，然後在4℃條件下10000 r/min、15 min離心取上清液，調節pH至4.0、6.5、7.0、7.5、8.0，在85℃水浴加熱20 min後，立即4℃冰水浴冷卻，獲得不同pH的PPP-NP的穩定懸浮液。同時設置對照樣品，不做任何處理。

1.2.3粒徑和Zeta-電位測定

粒徑和Zeta-電位由Nano ZS+MPT-2 Malvern納米粒度分析儀測定。參考文獻的方法，並稍作修改。用相應pH的超純水稀釋至0.4 mg/mL，在25℃下平衡120 s後測定。

1.2.4表麵形貌觀察

將1.2.2製備的懸浮液使用液氮進行速凍後，再對其進行冷凍幹燥獲得樣品粉末備用，將樣品粉末均勻分散於導電膠上，使用場發射掃描電子顯微鏡觀察樣品的表麵形貌。

1.2.5圓二色光譜分析

參考文獻的方法，並在其基礎上修改。用相應pH的超純水將1.2.2製備的懸浮液稀釋至1 mg/mL。利用0.1 cm的石英比色皿，在190~240 nm的波長範圍內進行掃描，取三次掃描結果的平均值生成數據。

1.2.6界麵張力測定

使用Tracker界麵流變儀測量了不同pH的PPP-NP降低油水界麵張力的能力。參考文獻的方法，稍作修改。將1.2.2製備的PPP-NP用相應pH的超純水稀釋10倍，然後添加到一個光學玻璃樣品皿中（40 mm×40 mm×30 mm），油相MCT添加到U型注射器（彎曲G18，內徑0.84 mm，長度10 cm）。在恒定的油滴體積下，監測了6000 s內界麵張力值的變化，直到達到平衡。所有測量均在25℃下進行。

1.2.7不同pH下PPP-NP穩定的Pickering乳液的製備

將1.2.2製備的懸浮液與油相（MCT）按體積比9:1混合，先高速剪切3 min形成粗乳液，再75 MPa高壓均質製備Pickering乳液。

1.2.8乳液的粒徑測定

使用Mastersizer 2000激光粒度儀測定乳液液滴的大小和分布情況。測定乳液液滴的大小和分布情況。參考文獻的方法，測定前使乳液與分散劑（去離子水）充分混勻後進行測試，其中樣品折射率設置為1.47，分散劑折射率為1.33；泵速為2000 r/min。液滴的大小用體積加權平均粒徑（Volume-weighted diameter，d4,3）表示。其中計算公式如下：

式中：di表示油滴直徑，μm；ni表示直徑為di的油滴數量。

1.2.9乳液表觀粘度的測定

通過安東帕MCR92流變儀中帶有的不鏽鋼板和板的幾何測量單元（pp-25，直徑25 mm）對乳液的表觀粘度進行測量。參考文獻的方法並加以修改。將製備的新鮮乳液放置在兩個平行板之間，間隙高度設置為1 mm。在0.1~1000 s−1的剪切速率範圍內進行剪切掃描，研究乳液表觀粘度的變化。

1.2.10乳液的儲藏穩定性

參考文獻的方法並加以修改。將新鮮製備的乳液（20 mL）轉移到30 mL玻璃瓶中，然後在45℃進行加速實驗，定期監測乳液的視覺外觀、粒徑和電位的變化，觀察其儲存穩定性。

1.2.11乳液的微觀結構

采用LEICA SP8共聚焦激光掃描顯微鏡觀察乳液的微觀結構。參考文獻的方法並稍加修改。將20µL的尼羅紅（2 mg/mL，溶於異丙醇）加入到1 mL乳液中，充分混勻完成染色。取染色後的乳液10µL塗在顯微鏡載玻片上，然後用蓋玻片覆蓋。在488 nm（Ar-Kr激光器）激發波長下，在25℃下采集物鏡放大倍數為63×，像素為1024×1024的乳液顯微圖像，並在45℃的加速儲藏條件下定期監測其乳液微觀結構的變化。

1.2.12多重光散射

利用多重光散射技術通過測定穩定性指數（Turbiscan stability index，TSI）和相對背散射光（Relative backscattered light，ΔBS）的變化來評估Pickering乳液的穩定性。實驗過程中，將新鮮製備的乳液（20 mL）轉移到其樣品瓶中，要求乳液不能有氣泡，儀器平衡後立即進行測定。設置掃描程序為45℃掃描48 h，每1 h進行一次掃描，通過儀器所帶軟件得到Pickering乳液的整體TSI值變化情況以及ΔBS隨時間的變化曲線。通過樣品的掃描圖譜變化情況，分析乳液的穩定性。

1.3數據處理

所有實驗至少重複3次，結果之間的差異用平均值±標準差（Standard deviation，SD）表示，使用Origin Pro 2017對結果進行統計分析，實驗數據采用SPSS 23進行統計學分析，應用Duncan檢驗分析樣品之間差異的顯著性，並且在P<0.05時定義顯著差異。